تولید نانوبادی علیه ویروس پاپیلومای انسانی با روش نمایان سازی فاژی و تعیین خصوصیات آن

ویروس پاپیلومای انسانی عامل اصلی سرطان دهانه رحم می باشد. عفونت پایدار با تیپ های پر خطر ویروس پاپیلومای انسانی به مدت طولانی منجر به سرطان دهانه رحم و نئو پلازی های اینترا اپیتلیال می گردد. سرطان دهانه رحم پس از سرطان سینه دومین عامل مرگ و میر در زنان می باشد. متاسفانه این سرطان در کشورهای در حال توسعه از شیوع بیشتری برخوردار است. ابتلا به این ویروس علایم خاصی ندارد و به راحتی از فردی به فرد دیگر انتقال پیدا می کند. مطالعات انجام شده نشان می دهد روش های موثر در پیشگیری از عفونت ویروس پاپیلومای انسانی می تواند منجر به کاهش شیوع و مرگ و میر ناشی از سرطان دهانه رحم گردد. اخیرا با پیشرفت هایی که در زمینه ساخت آنتی بادی های مونوکلونال صورت گرفته است امید های تازه ای در پیشگیری، درمان هدفمند و تشخیص زود هنگام بسیاری از بیماری ها از جمله سرطان ها حاصل شده است. نانوبادی ها کوچکترین قطعه متصل شونده به آنتی ژن می باشند که از آنتی بادی های زنجیره سنگین شتری مشتق شده اند. نانوبادی ها در مقایسه با آنتی بادی های معمولی خواص ویژه ای از خود نشان می دهند که از جمله آنها کوچکی اندازه، پایداری بالا، حلالیت زیاد و قابلیت تولید انبوه می باشد. این تحقیق با هدف تولید نانوبادی اختصاصی علیه پروتئین l1 ویروس پاپیلومای انسانی و اتصال آن به آنزیم hrp صورت گرفت. به این منظور با استفاده از تکنیک نمایش فاژی در ابتدا کتابخانه فاژمیدی علیه پروتئین l1 چهار تیپ ویروس پاپیلومای انسانی شامل تیپ های 6، 11، 16 و 18 غنی سازی شد. چندین کلون از کتابخانه غنی سازی شده جداسازی شدند و با استفاده از تکنیک مونوکلونال فاژ الایزا مورد بررسی قرار گرفتند. توالی بهترین کلون ها تعیین و بررسی شد. سپس بیان قطعات نانوبادی در باکتری rosetta gami 2 انجام شد و به کمک تکنیک الایزا مورد ارزیابی قرار گرفت. پس از این مرحله نانوبادی های انتخاب شده از نظر ویژگی، حساسیت و تمایل اتصال تعیین خصوصیت شدند. دو نانوبادی برای تولید انبوه انتخاب شدند که تولید آنها توسط تکنیک sds-page مورد بررسی قرار گرفت. سپس این دو نانوبادی به کمک ستون ni- nta تخلیص شدند و کیفیت تخلیص آنها با روش وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت. در پایان بهترین نانوبادی به آنزیم hrp متصل شد و عملکرد آن به کمک تست الایزا بررسی گردید. نانوبادی تخلیص شده قادر به اتصال اختصاصی و با افینیتی بالا به آنتی ژن l1 ویروس پاپیلومای انسانی تیپ 16 می باشد. از این نانوبادی می توان جهت شناسایی پروتئین l1 ویروس پاپیلومای انسانی تیپ 16 استفاده نمود. همچنین کاربرد این نانوبادی در زمینه پیشگیری و تشخیص عفونت ویروس پاپیلومای انسانی می تواند تحت بررسی های بیشتری قرار گیرد.